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固相萃取的基本原理及操作步骤

2018-8-13 9:06:41      点击:

固相萃取(SPE),是一种比较常见的样品前处理技术,主要用于样品的分离、净化和富集,主要目的在于降低样品的基质干扰,提高检测的灵敏度。本文克莱克特就来为大家讲讲固相萃取的基本原理及操作步骤。

固相萃取的基本原理是样品在两相之间的分配,即在固相(吸附剂)和液相(溶剂)之间的分配。其保留或洗脱的机制取决于被分析物与吸附剂表面的活性基因,以及被分析物与液相之间的分子间作用力。

固相萃取技术是一个柱色谱分离过程,可分为正相、反相、离子交换等多种分离模式。用固相萃取只能分开保留性质有很大区别的化合物,固相萃取不是以恒组分方式而是以“数字式”开关方式进行分离的,通过阶式梯度,目标化合物不是被吸附剂牢固吸附就是完全不被保留。

一个完整的固相萃取步骤包括固相萃取柱的预处理、上样、洗去干扰杂质、洗脱及收集分析物四个步骤。

(1)固相萃取柱的预处理。在萃取样品之前,吸附剂必须经过适当的预处理,一是为了润湿和活化固相萃取填料,以使目标萃取物与固相表面紧密接触,易于发生分子间相互作用;二是为了除去填料中可能存在的杂质,减少污染。

(2)上样。将样品倒入活化后的固相萃取小柱,然后利用加压、抽真空或离心的方法使样品进入吸附剂。采取手动或泵以正压推动或负压抽取方式,使液体样品以适当流速通过固相萃取柱,此时样品中的目标萃取物被吸附在固相萃取柱填料上。

(3)洗去干扰杂质。洗涤的目的是为了除去吸附在固相萃取柱上的少量基体干扰组合,一般选择中等强度的混合溶剂,尽可能除去基体中的干扰组分,又不会导致目标萃取物流失。如反相萃取体系常选用一定比例组成的有机溶剂水混合液。

(4)洗脱及收集分析物。选择适当的洗脱溶剂洗脱被分析物,收集洗脱液,挥干溶剂以备后用或直接进行在线分析。为了尽可能将分析物洗脱,使比分析物吸附更强的杂质留在SPE柱上,需要选择强度合适的洗脱溶剂。